Herpes gestationis autoantibodies recognize a 180-kD human epidermal antigen. Dr. Ricardo Machado Xavier Clin Diagn Lab Immunol 11: 297-301, 2004. A técnica de SS consiste em incubar a pele normal humana em solução de cloreto de sódio a 1,0M (NaCl 1,0M) por 72 horas, a 4ºC, com uma troca diária da solução durante esse período. Está na intensidade dos fluorocromos que às vezes dificultam o diagnóstico, a metodologia é cara e o custo da manutenção dos aparelhos e do microscópio é alta, a técnica é realizada manualmente podendo ocasionar erros e subjetividade na leitura. Ann Rheum Dis 60: 1131-6, 2001. J Cell Mol Med. 2004;51:62-7. ,  São Paulo,  A leitura foi feita em microscópio de fluorescência, modelo Olympus BX 50 sob aumento de 500 vezes(3). Has technological drift affected clinical interpretation? Neste grupo, destacam-se os depósitos granulosos no topo das papilas dérmicas da dermatite herpetiforme (DH), bem como a fluorescência vista na parede dos vasos nas vasculites e porfirias. Esses testes possuem sensibilidade e especificidade adequadas para caracterizar as amostras inicialmente reagentes. J Clin Invest. Visualização no microscópio (lembrando: sempre microscópio Uv nunca microscópio convencional). A positividade da mucosa oral é cerca de 90% a 100%, enquanto que, na conjuntiva, oscila entre 65% e 85%.26-27, 2.2 Depósitos lineares múltiplos (IgA, IgG, IgM e/ou C3) na zona da membrana basal, Esses depósitos favorecem o diagnóstico para as dermatoses anticolágeno VII: a epidermólise bolhosa adquirida (EBA) e o lúpus eritematoso sistêmico bolhoso (LESB).3,28-29, Epidermólise bolhosa adquirida e lúpus eritematoso sistêmico bolhoso, IFD: Depósitos lineares ou homogêneos de IgG, IgM, IgA, C3 na ZMB (Figura 4B). 1967;29;200:751-6. IFI: Revela anticorpos IgG circulantes anti-ZMB em 25%-50% dos doentes. Não há correlação dos títulos de anticorpos com a extensão ou atividade da doença. RESULTADOS: das 392 solicitações analisadas 90 eram anti-ENA positivo. CONCLUSION: ANA testing by IIF using HEp-2 cells proved to be a good screening test for the detection of anti-SSA/Ro antibodies, that showed a strong positive association to the speckled nuclear IIF pattern. 2007;11:462-81. O quadro envolve pele e mucosas e há associação com neoplasias (tumor de Castleman, linfomas, timomas). O teste de FAN em células HEp-2 por IFI mostrou ser um bom método de rastreamento para a detecção de auto-anticorpos anti-SSA/Ro, apresentando maior associação com o padrão nuclear pontilhado fino e com os quadros clínicos de LES e síndrome de Sjögren. In: Sampaio SA, Rivitti E, eds. Como teste prognóstico, o TBL deve ser realizado em área não exposta de pele normal (região glútea ou porção flexora do antebraço). Nas doenças reumáticas, uma das principais características é a produção de auto-anticorpos, com alta afinidade contra constituintes intracelulares e extracelulares, fazendo com que estes sejam marcadores específicos dessas doenças. Circulation 110: 1542-8, 2004. | Prof. Dr. Victor Proença. 2.1 Depósitos lineares de IgG e/ou C3 na zona da membrana basal, IFD: Depósito linear ou fibrilar ao longo da zona de membrana basal com o conjugado anti-C3 (Figura 4A), em 100% dos espécimes, e de IgG ao redor de 90%; IgA e IgM são raramente evidenciados. Imunofluorescência é definida como uma técnica que possibilita a visualização de antígenos nos tecidos ou em suspensões celulares, por meio da utilização de anticorpos específicos, marcados com fluorocromo, capazes de absorverem a luz ultra-violeta (UV), emitindo-a num determinado comprimento de onda, permitindo sua observação ao microscópio de fluorescência (com luz UV). Claudia Bastos Barroso Curso de Especialização em Controle da Qualidade de Produtos, Ambientes e Serviços Vinculados à Vigilância Sanitária. Devem ter uma conjugação relativamente simples, retenção da atividade do anticorpo na proteína marcada e estabilidade do conjugado fluorescente obtido. A.; AGUIAR, P. H. P.; MELO, S. M. B.; FRANKE, C. R. A UTILIZAÇÃO DA IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA NO DIAGNÓSTICO DE ROTINA DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA E SUAS IMPLICAÇÕES NO CONTROLE DA DOENÇA. 5) O que é reação de Imunofluorescência indireta? Avaliação do desempenho da metodologia de imunofluorescência indireta IFI para HIV-1 frente a outros métodos de diagnóstico da infecção pelo HIV/aids. Trabalho realizado no Departamento de Dermatologia, Laboratório de Imunopatologia Cutânea, Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (USP) - São Paulo (SP), Brasil. A IFD auxilia na confirmação diagnóstica do LE, diferenciando-o de outras doenças. Não são achados exclusivos do LE, uma vez que são frequentes no líquen plano (LP) e em outras dermatoses inflamatórias. Biomédica, Especialista em Imuno-hematologia, MAB em Auditoria em Saúde. A imunofluorescência é uma metodologia baseada em uma marcação pelos antígenos utilizados tanto nos tecidos quanto em soro humano ou animal, e assim por meio de anticorpos específicos, marcados com fluorocromos, onde essas substâncias são capazes de absorverem a luz ultravioleta (UV), emitindo-a num determinado comprimento de onda, e assim permitindo sua observação ao microscópio de fluorescência (com luz UV), com isso podemos identificar e diagnosticar precisamente sua presença pela sua fluorescência. O autoantígeno principal do penfigoide das membranas mucosas (PMM) é a laminina 5 (calinina), mas o BP180 e a proteína a6b4 também são citados. 21. O melhor local e o tempo de evolução das lesões cutâneas para realizar biópsia para o exame de imunofluorescência direta (IFD) dependem da enfermidade em investigação. Cell 67: 841-2, 1991. The development of immunofluorescence and the immunopathology of the skin. Bohan A, Peter JB: Polymyositis and dermatomyositis (first of two parts). 2003;120:104-8. Aprovado pelo Conselho Editorial e aceito para publicação em 31.07.2009, Suporte financeiro: CNPq-processo 303493/2008-9 e CNPq-processo 803070/87.0, Este artigo sofreu alterações por solicitação do editor em Nov/2010 conforme ERRATA publicada no Volume 85 Número 6 do periódico. No pênfigo vulgar (PV) com lesões exclusivas de mucosa, os autoanticorpos da classe IgG dirigem-se, geralmente, contra a desmogleína 3 (Dsg3), um autoantígeno de maior expressão nas porções inferiores da epiderme. O microscópio de epi fluorescência é utilizado e uma reação imunofluorescente é desencadeada no microscópio de epi fluorescência, ocorrendo após a emissão de luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto comprimento de onda (Figura 1). This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License. General Valdomiro de Lima, 508 | São Paulo | SP | CEP: 04344-070. Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, et al: The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. 24. IFD: Depósitos de IgG e C3 intercelulares, estes últimos com localização predominante nas camadas inferiores dos epitélios (Figura 2B) no PV com envolvimento mucoso, em 100% dos casos de doença ativa. Na primeira etapa, anticorpos não-marcados são adicionados a células infectadas fixadas a uma lâmina de microscópio. Orton SM, Peace-Brewer A, Schmitz JL, Freeman K, Miller WC, Folds JD: Practical evaluation of methods for detection and specificity of autoantibodies to extractable nuclear antigens. Hoje, a pesquisa do fator antinuclear (FAN), usando como substrato células HEp-2 é a metodologia de escolha para rastreamento e identificação dos padrões de imunofluorescência à qual os diversos auto-anticorpos se associam. * Também ocorre predomínio de IgG4 na doença ativa.5,14-15,41, No pênfigo paraneoplásico (PNP) existe um reconhecimento de autoantígenos do epitélio vesical murino em 83% dos casos (Figura 9). Gastroenterology. Pelo menos na nossa experiência, esses dados questionam o custo-efetividade da solicitação de rotina desse exame em pacientes FAN negativo pelo teste de IFI. Em testes quantitativos, o título resultante é aquele onde ainda se detecta a fluorescência no substrato.3,5, Dermatoses bolhosas intraepidérmicas: pênfigos. JAMA. Os fluorocromos mais utilizados: Fluoresceína (FITC fluoresceína isocianetada) e Rodamina (TRICT). As hemácias foram previamente sensibilizadas com os antígenos RNP, Sm, SSA/Ro, SSB/La e Scl-70; e incubadas com soros diluídos 1:50 (50µl) em solução salina por 90 minutos à temperatura ambiente. No SS, usualmente, apresentam fluorescência no lado epidérmico da clivagem.28, Fator HG: É uma técnica de IFI amplificada, em que se adiciona uma fonte de complemento (soro humano normal fresco). OBJETIVO: avaliar os padrões de imunofluorescência do fator antinuclear (FAN) em soros reagentes para anticorpos anti-SSA/Ro e sua associação clínica. 05403 002 São Paulo - SP, Brasil Autoanticorpos da classe IgG dirigem-se contra a desmogleína 1 (Dsg1), o principal autoantígeno no pênfigo foliáceo. Pelo menos na nossa experiência, esses dados questionam o custo-efetividade da solicitação de rotina desse exame em pacientes FAN negativo pelo teste de IFI. A imunofluorescência é uma metodologia baseada em uma marcação pelos antígenos utilizados tanto nos tecidos quanto em soro humano ou animal, e assim por meio de anticorpos específicos, marcados com fluorocromos, onde essas substâncias são capazes de absorverem a luz ultravioleta (UV), emitindo-a num determinado comprimento de onda, e assim permitindo sua observação ao microscópio de fluorescência (com luz UV), com isso podemos identificar e diagnosticar precisamente sua presença pela sua fluorescência. J Clin Invest. Todos os pacientes positivos para o auto-anticorpo anti-SSA/Ro foram positivos também para o teste FAN com células HEp-2, mostrando 100% de sensibilidade desse teste para a detecção de anti-SSA/Ro. À semelhança da IFD, a IFI nos pênfigos apresenta fluorescência intercelular, de padrão linear, intraepitelial (Figura 8). A rodamina, outro agente utilizado na IFD, de cor vermelha, possui picos distintos de absorção e de emissão (520l e 610l). Av. http://nefropatologia.com.br/servico/imunofluorescencia-direta/. Figura 1 – Microscópio de epi fluorescência https://pt.wikipedia.org/wiki/Microscopia_de_fluoresc%C3%AAncia. Os quadros clínicos dos pacientes anti-SSA/Ro positivo estão demonstrados na Tabela 3; LES foi o quadro clínico mais encontrado em 33 dos 61 pacientes. 37. Hoffman IEA, Peene I, Veys EM, De Keyser F: Detection of specific antinuclear reactivities in patients with negative anti-nuclear antibody immunofluorescence screening tests. A fluorescência específica deve-se à reação entre o substrato e a proteína marcada com o fluorocromo (reação antígeno-anticorpo). A reação é revelada por anticorpos secundários anti-humanos (IgG, IgA, IgM e C3), produzidos em coelhos, murinos ou caprinos, e conjugados ao isotiocianato de fluoresceína (FITC). Aoki V, Huang MH, Perigo AM, Fukumori LM, Maruta CW, Santi CG, et al. No entanto, o teste de FAN deve ser complementado pela pesquisa e identificação de auto-anticorpos e auto-antígenos específicos, muitos dos quais apresentam grande utilidade clínica(4). Tan EM: Autoantibodies and Autoimmunity: A Three-Decade Prespecive. Podem ocorrer depósitos de IgG, IgM, IgA e C3, além de outros imunorreactantes na ZMB. Encontramos associação entre anti-ENA positivo e FAN positivo em 97,7% (88/90). No teste de indução com oxacilina houve (English), Text A zona da membrana basal (ZMB) ou junção dermoepidérmica apresenta inúmeras proteínas ou glicoproteínas que servem de antígenos-alvo para diversas dermatoses bolhosas autoimunes. Semin Arthritis Rheum 24: 323-58, 1995. Atualmente, as técnicas mais comumente usadas para a detecção de anticorpos anti-dsDNA são os ensaios imunoenzimáticos e a IFI, sendo esta última mais específica, detectando anticorpos de moderada e alta afinidade que se relacionam com atividade do LES. Trabalho realizado no Departamento de Dermatologia, Laboratório de Imunopatologia Cutânea, Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (USP) - São Paulo (SP), Brasil. 10. Giudice GJ, Emery DJ, Zelickson BD, Anhalt GJ, Liu Z, Diaz LA. O padrão de imunofluorescência mais freqüente para anti-SSA/Ro positivo foi nuclear pontilhado fino (42/61). O teste do ENA foi realizado de acordo com o protocolo proposto pelo fabricante (Virgo/Hemagem, EUA). Clin Dermatol. No entanto, esses auto-anticorpos somente possuem significado clínico quando estão associados a outras manifestações de doença(1). Imunofluorescência direta e indireta. O presente artigo objetivou comparar os resultados obtidos através das técnicas de Imunofluorescência indireta (IFI) e Hemaglutinação indireta (HAI) na detecção de anticorpos para Toxoplasma gondii em soros de suínos. 4) O que é reação de imunofluorescência direta? Sanchez-Guerrero J, Lew RA, Fossel AH, Schur PH: Utility of anti-Sm, anti-RNP, anti-Ro/SS-A, and anti-La/SS-B (extractable nuclear antigens) detected by enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of systemic lupus erythematosus. Proc Natl Acad Sci U S A. Reumatol. Figura 3 – Imunofluorescência Direta feita em tecido, padrão ouro em diagnóstico direto (fonte: Instituto de Nefropatologia). 43. Alameda Araguaia, 2400,Alphaville Industrial,Barueri - SP, 06472-001. Enviar orientações para seu e-mail. Ann Rheum Dis 61: 929-33, 2002. Imunofluorescência Indireta (IFI) Esta técnica é usada para identificar antígenos ou anticorpos. ), como já foi relatado por inúmeros autores(26,29-33). No PF e no PV, a IFI utilizando como substrato o epitélio vesical murino é usualmente negativa, mas existem doentes, especialmente os de PV com predomínio de lesões mucosas, que apresentam reatividade contra a desmoplaquina1.17-18,42, IFI: Caracteriza-se por depósitos de IgA intercelulares intraepidérmicos, sendo positiva em cerca de 50% dos casos.19-20, IFI: Revela anticorpos circulantes da classe IgG anticolágeno XVII (BP180) em 70% dos pacientes. Kulthanan K, Jiamton S, Varothai S, Pinkaew S, Sutthipinittharm P. Direct immunofluorescence study in patients with lichen planus. Clin Exp Dermatol. Bossuyt X, Frans J, Hendrickx A, Godefridis G, Westhovens R, Marien G: Detection of anti-SSA antibodies by indirect immunofluorescence. N Engl J Med 292: 344-7, 1975. Diferente do que tem sido descrito na literatura, não encontramos nenhuma amostra de pacientes com anti-SSA/Ro que tenham apresentado FAN falso-negativo na IFI. 2009;34:314-8. RESULTADOS: das 392 solicitações analisadas 90 eram anti-ENA positivo. Warren SJ, Arteaga LA, Rivitti EA, Aoki V, Hans-Filho G, Qaqish BF, et al. Entre em contato com a nossa Central de Atendimento e agende seu exame pelo Whatsapp (11) 3179-0822. A técnica de IFI aplicada a estudos de anticorpos circulantes nas DVBs utiliza como substrato o epitélio normal. Mais sensível e de execução mais fácil que a pesquisa de células LE, em 1982 o FAN passou a fazer parte dos critérios revisados do American College of Rheumatology, como um dos onze critérios diagnósticos de LES 5 . • Permite-se trabalhar com vários anticorpos primários específicos para vários sítios de antígenos, sendo eficaz na identificação ao qual o anticorpo pertence, abrangendo o campo de diagnóstico mais preciso. Morrison LH. (1982) descreveram uma comparação entre os testes de ELISA e imunofluorescência indireta (IFI) para detectar anticorpos contra B. bovis, com amostras de soros conhecidas e encontraram mais de 95% de concordância entre os dois métodos, sendo a prova de ELISA mais sensível do que IFI. Nas vasculites, os imunodepósitos localizam-se, em geral, nas paredes das vênulas pós-capilares da derme superficial, uma vez que os processos mais frequentes são as vasculites leucocitoclásticas (VLC) e a púrpura de Hennoch-Schönlein (PHS). J Clin Pathol 54: 187-90, 2001. 1991;9:295-311. 3. Pollock W, Toh BH: Routine immunofluorescence detection of Ro/SS-A autoantibody using HEp-2 cells transfected with human 60 kDa Ro/SS-A. (Portuguese), Resumo CEP 90035-003, Porto Alegre, RS, Brasil LAD-1, the linear IgA bullous dermatosis autoantigen, is a novel 120-kDa anchoring filament protein synthesized by epidermal cells. 16. Carolina Sichinger Moura de Souza. Essa técnica pode ser realizada tanto em tecidos como em soro. RESULTS: 90 out of the 392 solicitations analyzed were anti-ENA positive, with a predominance of women (86/91 – 94%) and the mean age was 42 years old. Egner W: The use of laboratory tests in the diagnosis of SLE. IFD: Depósitos granulosos, fibrilares ou pontilhados de IgA são encontrados nas papilas dérmicas (Figura 5A). 2004;59:251-6. Int J Dermatol. anticorpos e antígenos amebianos circulantes (GANDHI et ai., 1987; NEAL et ai., 1968), a hemoaglutinação indireta e a imunofluorescência indireta, são sensíveis, específicas e amplamente utilizadas no diagnóstico da amebíase e em levantamentos. Hans-Filho G, dos Santos V, Katayama JH, Aoki V, Rivitti EA, Sampaio SA, et al. Após o procedimento, o material pode ser imediatamente congelado em nitrogênio líquido ou colocado no meio de transporte adequado, o meio de Michel.7 Este é composto de sulfato de amônio, N-etil-maleimida e sulfato de magnésio em um tampão citrato, que permite a conservação do espécime por até duas semanas.8-9, O espécime é, então, seccionado em um criostato, em fragmentos de quatro micra de espessura. Das solicitações com resultado positivo para anti-ENA identificou-se qual ou quais auto-anticorpos estavam envolvidos (anti-SSA/Ro, anti-SSB/La, anti-RNP, anti-Sm, anti-Scl-70), bem como os padrões de imunofluorescência do FAN e os quadros clínicos dos pacientes anti-SSA/Ro positivo. Endereço para correspondência: Pemphigus herpetiformis is a rare clinical expression of nonendemic pemphigus foliaceus, fogo selvagem, and pemphigus vulgaris. O auto-antígeno SSA/Ro é uma ribonucleoproteína, composta de uma porção polipeptídica e outra de quatro pequenas moléculas de RNA. A IFI apresenta reação cruzada com a leishmaniose visceral e a doença de Chagas. Phan TG, Wong RC, Adelstein S: Autoantibodies to extractable nuclear antigens: making detection and interpretation more meaningful. James K, Carpenter AB, Cook L, Marchand R, Nakamura RM: Development of the antinuclear and anticytoplasmic antibody consensus panel by the Association of Medical Laboratory Immunologists. Realiza-se a diluição do soro teste, colocando-o sobre o antígeno e incubando-o para que possa formar o complexo antígeno-anticorpo. J Rheumatol 26: 914-9, 1999. As reações sorológicas de imunofluorescência indireta e os testes imunoenzimáticos (ELISA) são muitos úteis, principalmente nos casos com lesões extensas e múltiplas e no diagnóstico precoce das lesões mucosas secundárias ou primárias. J Clin Pathol 53: 424-32, 2000. É utilizado em situações de dúvida diagnóstica e aumenta a sensibilidade da IFI no HG para 50%.28, IFI: Anticorpos circulantes da classe IgA são raros (7% a 30% dos casos) e a IFI deve ser realizada para afastar outras dermatoses, como o PB.3,28,30, SS: Positivo no lado epidérmico em 60%-70% dos casos.3,30. Agradecemos aos funcionários do Serviço de Reumatologia e do Serviço de Patologia Clínica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, especialmente às bioquímicas Marta Bergman Senger, Maria Clara Medina Correa e Dra. Arch Pathol Lab Med 124: 71-81, 2000. 25. Como conclusão, pode-se considerar a imunofluorescência (direta e indireta) como um método sensível e específico de detecção de autoanticorpos in situ e circulantes nas dermatoses vesicobolhosas autoimunes; nas dermatoses inflamatórias, pode ser um recurso laboratorial auxiliar para o diagnóstico definitivo da enfermidade em investigação. 1988;81:2023-6. Serviços de Reumatologia e Serviço de Patologia Clínica (SPC), Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Jablonska S, Chorzelski TP, Beutner EH, Chorzelska J. Herpetiform pemphigus, a variable pattern of pemphigus. utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico para a pesquisa de anticorpos anti-HHV-8 em amostras de sangue colhidas em membrana Schleicher Schuell de 28 pacientes com sarcoma de Kaposi (SK)/AIDS e 10 indivíduos sadios sem SK, dos quais os soros haviam sido anteriormente usados na padronização destas técnicas. MÉTODO: foi realizado um estudo transversal retrospectivo, no qual foram revisadas as solicitações de anticorpos antiantígenos nucleares extraíveis (anti-ENA) encaminhadas ao SPC/HCPA no período de dois anos. 1988;19:792-805. ,  Universidade de São Paulo,  Faculdade de Medicina ,  Departamento de Dermatologia,  Brazil, ,  São Paulo,  A coleta deve ser realizada dentro das primeiras 24 horas, visto que os imunocomplexos são rapidamente degradados. : publicar em repositório institucional ou como capítulo de livro), com reconhecimento de autoria e publicação inicial nesta revista. Sabia que o Fleury oferece parcelamento em até 10x sem juros e condições especiais para pagamento particular para os médicos cadastrados? 1993;151:5742-50. Bullous pemphigoid and herpes gestationis autoantibodies recognize a common non-collagenous site on the BP180 ectodomain. 42 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Especialização em Controle da Qualidade de Produtos, Ambientes e Serviços Vinculados à Vigilância Sanitária) - Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2010. O segundo auto-anticorpo mais freqüente foi anti-RNP, representando 48,8% da amostra, seguido por anti-SSB/La (17,7%), anti-Sm (16,6%) e anti-Scl-70 (1,1%). A - IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA O melhor local e o tempo de evolução das lesões cutâneas para realizar biópsia para o exame de imunofluorescência direta (IFD) dependem da enfermidade em investigação. 9. Li N, Aoki V, Hans-Filho G, Rivitti EA, Diaz LA. Citometria de fluxo: aplicações, vantagens e desvantagens, Curso de Citometria de Fluxo (clique aqui), Imunofluorescência direta e indireta: conheça as diferenças, aplicações, vantagens e desvantagens, Como atua a medicação para o HIV? A cada secção aplicam-se os anticorpos anti-humanos primários conjugados à fluoresceína FITC (anti-IgA, anti-IgG, anti-IgM e anti-C3) e realiza-se a leitura através do microscópio de fluorescência (Figura 1).3. Entretanto, a IFI não é facilmente aplicada a inquéritos em larga escalafa zendo-se necessário o emprego de um teste para a triagem de animais infectados. 8. Beutner EH. IFD: Encontram-se depósitos de IgG e C3 intercelulares ao longo de toda a epiderme (Figura 2A) em 100% dos casos na doença ativa.3 Autoanticorpos da classe IgG depositam-se, também, no epitélio escamoso oral, apesar da ausência de lesões clínicas de PFE nas mucosas.3,12 Subclasses de IgG podem ser empregadas, revelando que, em pacientes com lesões de PF ativas, o isótipo de IgG mais predominante é a IgG4, em contraste com a IgG1, mais encontrada nos doentes em remissão.13, Autoanticorpos da classe IgG depositam-se na pele e no epitélio escamoso oral. Após a incubação do soro diluído do doente (a partir de 1:20) com o substrato por 30 minutos, à temperatura ambiente em câmara úmida, segue-se a lavagem com o tampão trizma base/cálcio (TBS Ca2+). Peene I, Van Ael W, Vandenbossche M, Vervaet T, Veys E, De Keyser F: Sensitivity of the HEp-2000 substrate for the detection of anti-SSA/Ro60 antibodies.Clin Rheumatol 19: 291-5, 2000. Skin manifestations of celiac disease. Henoch-Schonlein vasculitis: direct immunofluorescence study of uninvolved skin.
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